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CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術(shù)培訓(xùn)

理論講解：
一、基因編輯技術(shù)簡介
1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR
二、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)
1.guide RNA序列設(shè)計(jì)
2.靶基因序列查找
3.sgRNA在線設(shè)計(jì)、特異性分析和效率驗(yàn)證
4.不同物種sgRNA設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)操作：
一、CRISPR/Cas9基因表達(dá)載體克隆構(gòu)建
1.sgRNA設(shè)計(jì)合成
2.敲除載體選擇及線性化
3.sgRNA連接，轉(zhuǎn)化等
理論講解：
一、CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染策略
1.生物轉(zhuǎn)染 2.物理轉(zhuǎn)染 3.化學(xué)轉(zhuǎn)染 4.篩選策略選擇
二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，電轉(zhuǎn)，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，顯微注射等）
三、Crispr/Cas9轉(zhuǎn)染策略（植物，動物，原核生物）
四、CRISPR/Cas9病毒系統(tǒng)選擇
實(shí)驗(yàn)操作：
CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞
理論講解：
一、CRISPR技術(shù)應(yīng)用解析
1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的應(yīng)用4.CRISPR靶基因標(biāo)記定位5.基因敲除小鼠模型構(gòu)建策略
二、CRISPR案例解析
1.基因敲除小鼠模型構(gòu)建2.植物基因敲除應(yīng)用3.細(xì)菌，真菌等基因敲除應(yīng)用
三、Cripr基因脫靶分析及解決方案
四、Crispr/Cas9與siRNA、shRNA
實(shí)驗(yàn)操作：
1.CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染后靶DNA檢測
2.靶基因修飾位點(diǎn)擴(kuò)增及鑒定
理論講解：
一、單堿基基因編輯技術(shù)
1.HF2-BE2 2.BE3系統(tǒng) 3.ABE系統(tǒng)。
二、CRISPR-Cpf1系統(tǒng)介紹
三、CRISPR-C2c2系統(tǒng)介紹
四、多靶點(diǎn)sgRNA載體構(gòu)建策略
五、Crispr/Cas9系統(tǒng)在腫瘤和遺傳病治療中應(yīng)用解析
實(shí)驗(yàn)操作：
1.CRISPR基因敲除效果檢測